Иммунологические аспекты диагностики рака предстательной железы

Введение

В контексте проблемы раннего выявления рака предстательной железы трудно переоценить значимость простато-специфического анти­гена и сопряжённых с ним показателей, а также роль современных визуализационных технологий. Тем не менее, «золотым стандартом» и единственным ин­струментом верификации диагноза РПЖ остаётся гистологический анализ структурных особенностей про­статы [1][2].

Важнейшей причиной диагностических ошибок при гистологическом исследовании является сход­ство микроморфологической симптоматики РПЖ с таковой для других форм патологии, обусловленных воспалением, гипо- или гипербиотическими процес­сами, доброкачественным опухолевым ростом. Таким образом, выявление аденокарцином может быть за­труднено вследствие их маскировки картиной добро­качественных нарушений.

Простатическая интраэпителиальная неоплазия (ПИН) высокой степени, а также нахождение в пре­паратах участков атипичной мелкоацинарной проли­ферации (ASAP) становятся показаниями к повторной биопсии [3].

Получение биоптатов простаты для гистологи­ческого исследования в настоящее время перешло в категорию рутинных процедур и выполняется как в условиях стационара, так и амбулаторно. Но, несмо­тря на это, биопсия все равно остаётся инвазивным методом. Болевые ощущения, гематурия, инфекция мочевой системы, дизурия, различные вазовагальные реакции, нарушения сексуальной функции и др. могут развиться непосредственно после процедуры и в бо­лее поздние сроки.

Усовершенствование методов гистологического ана­лиза биопсийного материала позволит уменьшить веро­ятность получения ложно-отрицательных результатов, сократить численность повторных биопсий, обеспечить своевременность начала лечебных мероприятий [4].

Затруднения в верификации диагноза аденокар­циномы простаты могут возникнуть в силу различных обстоятельств. Например, участки ASAP, встречаю­щиеся в 1-9% всех биопсий предстательной железы, маскируют аденокарциному в 18-75% случаев [5][6][7]. Наличие мелких (менее 1 мм) очагов, ПИН высокой степени также могут стать причиной ложно-отрица­тельного результата исследования [8].

К одному из признаков (критериев) морфологиче­ского атипизма при злокачественном перерождении клеток относится отсутствие базальных клеток желе­зистого аппарата предстательной железы [9].

Иммуногистохимический (ИГХ) метод изучения микроморфологической картины заболевания с при­менением антител клона 34βE12 и моноклональных антител к ядерному белку р63 позволяет, детализируя состояние базального эпителиального слоя желези­стых структур простаты, подтвердить или опровер­гнуть наличие аденокарциномы [10].

Антигеном для антител клона 34βE12 является вы­сокомолекулярный цитокертин (ВЦК), образующийся в немалигнизированных базальных эпителиоцитах простаты. Феномен ингибирования экспрессии ВЦК после злокачественного перерождения этих клеток может быть использован при ИГХ-диагностике адено­карциномы предстательной железы [11][12].

Малигнизация железистого базального эпите­лия также приводит к подавлению в нем биосинтеза ядерного белка р63, поэтому результаты теста с моно­клональными антителами к р63 позволяют судить о состоянии базальных эпителиоцитов, доброкаче­ственности или злокачественности нарушений ткане­вого роста [13][14][15].

Фермент α-метилацил-КоА-рацемаза (AMACR) яв­ляется продуктом экспрессии гена р504Б и участвует в β-окислении жирных кислот. AMACR образуется в митохондриях и пероксисомах малигнизированных клеток и в настоящее время расценивается как пер­спективный маркер аденокарциномы предстательной железы [6].

Целью настоящего исследования явилось изуче­ние возможностей ИГХ-идентификации опухолевых клеток и базального эпителиального слоя железистых структур простаты при подозрении на рак предста­тельной железы.

Материалы и методы

Материалом для исследования послужил биоп­сийный материал, взятый у 134 больных, находивших­ся на стационарном лечении в урологическом отделе­нии СПб ГБУЗ Клинической больницы Святителя Луки в период с 2015 по 2017 гг.

Подбор биоптатов осуществляли в соответствии с поставленной целью, для чего ориентировались на результаты гистологического изучения микропрепа­ратов, окрашенных гематоксилин-эозином. Таким об­разом, отобранный биопсийный материал был разде­лен на 2 группы.

В основную группу № 1 относили образцы ткани простаты, пораженные аденокарциномой (n=72), в группу № 2 - образцы здоровой ткани (n=62).

По завершении подготовительного этапа ис­следований (приготовление парафиновых блоков, окрашивание срезов толщиной 5 мкм гематоксилинэозином, затем непосредственно гистологическое исследование и разделение на группы) переходили к иммуногистохимическому анализу с применением моноклональных антител BioGenex к α-метилацил- КоА-рацемазе, ядерному белку р63 и высокомолеку­лярному цитокератину (антитела клона 34βE12).

В процессе ИГХ-анализа обращали внимание на экстенсивность и интенсивность окрашивания для AMACR, 34βE12 и ядерного р63.

Для статистической обработки полученных данных применяли пакет прикладных программ «STATISTICA 7», «Microsoft Excel 2010».

Результаты исследования

У пациентов основной группы, биоптаты которых содержали очаги опухолевого роста, концентрация ПСА в сыворотке крови равнялась в среднем 24,34 нг/мл (медиана 21,06 нг/мл, диапазон от 3,26 нг/мл до 63,46 нг/мл). В группе контроля средний сыворо­точный уровень ПСА составил 8,54 нг/мл с медианой, равной 6,35 нг/мл и вариабельностью от 1,36 нг/мл до 14,62 нг/мл.

Средний возраст пациентов основной группы, у которых при рутинном гистологическом исследовании была верифицирована аденокарцинома предстатель­ной железы, составил 58-84 года (медиана 67,2 лет). В группе контроля возраст обследованных варьировал от 55 до 68 лет, медиана была равна 62,5 лет.

Уровни экстенсивности и интенсивности иммун­ногистохимического окрашивания для AMACR, 34βΕ12 и ядерного р63 в основной и контрольной группах по­казаны в таблице 1.

Экстенсивность иммунной окраски для AMACR в образцах малигнизированной ткани превысила 90% в 76,39% случаев; преобладала высокая и умеренная интенсивность окрашивания. 98,39% доброкачествен­ных тканей не изменяли окраску в ответ на воздей­ствие поликлональных антител к AMACR.

Во всех микропрепаратах тканей предстательной железы поражённых аденокарциномой, практически отсутствовала реакция на антитела клона 34βΕ12 и моноклональные антитела к р63, в единичных случа­ях отмечалось слабое или, более редко, умеренное окрашивание (табл. 1).

Обсуждение

При воздействии поликлональных антител к α-метилацил-КоА-рацемазе на клетки аденокарци­номы, интенсивно продуцирующие AMACR, о со­стоявшейся иммунной реакции между антителами и AMACR свидетельствует появление коричневого окрашивания опухолевых клеток. В нашем исследо­вании данный признак проявился в 93,06% случаев с преимущественно высокой или умеренной интенсив­ностью окраски. Напротив, в здоровой ткани предста­тельной железы реакция на антитела к AMACR практи­чески отсутствовала. Аналогичные данные получили в 2002 году R. Beach et al., Z. Jiang et al., Yang XJ et al., в 2005 году - O. Hameed et al., в 2011 году - C. Boran et al. [15 - 19].

Однако, очевидно, что положительные результа­ты теста на рацемазу при ИГХ-выявлении аденокар­циномы простаты не следует считать абсолютными критериями верификации РПЖ. Согласно литератур­ным данным, иммунная реакция на антитела к AMACR может развиваться в условиях простатической интраэ- пителиальной неоплазии высокой степени и атипиче­ской аденоматозной гиперплазии со встречаемостью до 15-20% [19, 20]. Чувствительность AMACR-пробы существенно понижена при атрофических и псевдоги- перпластических формах ацинарной аденокарцино­мы предстательной железы [21, 22].

Результаты проведенного нами исследования позволяют с высокой вероятностью предположить, что иммуногистохимическое тестирование образцов ткани простаты с антителами клона 34βΕ12 и моно­клональными антителами к р63 является надежным способом выявления и оценки состояния базального эпителиоцитарного слоя железистых структур про­статы при подозрении на аденокарциному. Такого же мнения придерживаются S. SignoreW et al. (2000), N.A. Abrahams et al. (2002), K.R.M. Leite et al. (2010) и дру­гие авторы [13, 23, 24].

Заключение

При подозрении на рак предстательной железы иммуногистохимические исследования с монокло­нальными антителами к AMACR, р63 и высокомоле­кулярному цитокератину облегчают выявление та­ких критериев аденокарциномы, как формирование разрастаний малигнизированного эпителия проста­тических желез и утрата базального слоя здоровых эпителиоцитов. Качество визуализации микроморфо- логической картины повышается за счет выделения цветом объектов диагностического поиска с возмож­ностью полуколичественной оценки выраженности поражения. Некоторая ограниченность специфично­сти AMACR-теста (возможно окрашивание участков с ПИН или атипической аденоматозной гиперплазией) нивелируется одновременным иммунным реагирова­нием ядерного р63 и высокомолекулярного цитокера­тина с соответствующими антителами и детализацией вследствие этого состояния базального слоя.