На протяжении длительного времени счи­талось, что отрицательный результат куль­турального исследования мочи или отсут­ствие каких-либо уропатогенов является показателем стерильности и здоровья мочевого тракта [1]. В на­стоящий момент появляется все больше новых дан­ных о том, что моча здорового человека имеет свою уникальную микробиоту и виробиоту. Это стало воз­можным благодаря использованию расширенных ме­тодик культурального исследования мочи в аэробных и анаэробных условиях культивирования, а также метагеномных и молекулярно-биологических методов таких как, полимеразная цепная реакция (ПЦР) в ре­жиме реального времени, секвенирование гена 16S рРНК, саузерн- и нозерн-блоттинг [2][3].

В отношении характеристики качественного со­става микробиоты и/или микробиома мочи имеются единичные работы. Wolfe AJ et al. с помощью пиросеквенирования и ПЦР с праймерами направленными на гипервариабельные V1-V3 субрегионы эубактериальной 16S рРНК в средней порции мочи выявляли Lactobacillus, Actinobaculum, Aerococcus, Anaerococcus, Atopobium, Burkholderia, Corynebacterium, Gardnerella, Prevotella, Ralstonia, Sneathia, Staphylococcus,

Streptococcus, Veillonella как у здоровых женщин, так и с пролапсом тазовых органов или ургентным недер­жание мочи [4]. Nelson DE et al. в своём исследовании показали присутствие облигатных и/или факультатив­ных анаэробов в моче здоровых юношей [5]. Данные литературы относительно вирусных патогенов, вери­фицированных в моче и/или слизистой мочевого пу­зыря, или в других отделах мочевых путей в настоящее время не систематизированы и разрознены. Имеются сообщения о наличии в моче ВК-полиомавирусов, цитомегаловирусов (ЦМВ) и аденовируса у больных с геморрагическим циститом после аллогенной транс­плантации костного мозга и пересадки почек [6][7][8]. Для правильной интерпретации полученных резуль­татов по обнаружению каких-либо таксонов вирусов в моче, необходимо знать не только микробиоту мочи в норме, но и частоту присутствия вирусов. Цель ис­следования: изучить вирусно-бактериальные ассоци­ации в моче здоровых людей.

Обследованы 20 здоровых сексуально активных женщин и мужчин, которые по гендерному признаку разделены на равнозначные группы: I группа - здоро­вые женщины (n=10), II группа - здоровые мужчины (n=10). Возраст обследуемых колебался от 20 до 25 лет, средний возраст составил 22,4 + 1,2 года. Критерии включения групп в исследование: возраст до 25 лет, отсутствие гинекологических заболеваний в I группе, урологических заболеваний - в I и II группах, заболе­ваний, передающихся половым путем как в анамнезе, так и на момент исследования, отсутствие инфекцион­ных, генетических, аутоиммунных заболеваний, а так­же факторов риска (радиоактивное облучение и т.д.), отсутствие патологических изменений почек, мочевой системы, внутренних половых органов при ультразву­ковом исследовании, приема различных препаратов (антибиотиков, кортикостероидов) последние 2 меся­ца, а также противозачаточных - в I группе, формально нормативные показатели общего анализа крови и мочи, согласие обследуемых на участие в исследова­нии. Из исследования исключались мужчины с ранее диагностированным крипторхизмом и орхитом.

В обеих группах на исследование забирали сред­нюю порцию утренней мочи после соответствующей гигиенической процедуры при самостоятельном мо­чеиспускании обследуемых в стерильный пластико­вый контейнер (Sterile Uricol for urine sample collection «HiMedia»). Пробы мочи кодировали идентификаци­онным номером и разделяли на 3 аликвоты: 1 - для проведения общего анализа мочи, 2 - для бактерио­логического исследования, 3 - для проведения ПЦР. Бактериологическое исследование мочи проводили в соответствии с Клиническими рекомендациями («Бактериологический анализ мочи» (2014)). Помимо питательных сред, регламентированных в Клиниче­ских рекомендациях, использовали дополнительные хромогенные среды «HiMedia» для культивирования факультативно-анаэробных (ФАБ) и неклостридиальных анаэробных бактерий (НАБ). Соответственно использовали аэробные и анаэробные условия куль­тивирования. Идентификацию выделенных микро­организмов проводили по общепринятым признакам (морфо-тинкториальным, культуральным, биохими­ческим). В моче определяли присутствие ДНК папил- ломавирусов человека (HPV), вирусов простого герпе­са I и II типов (HSV I и II), цитомегаловирусов (CMV), вирусов Эпштейна-Барр (EBV) с помощью стандартной ПЦР, используя коммерческие ПЦР-диагностические наборы производства АО «Дон-технологи», «Литех» (Москва).

Статистические расчёты выполняли в R (версия 3.2, R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria). Различия анализировали на основе оценок частот встречаемости и концентраций. Для анализа сходства использовали метод Варда (расстояние Брея- Кёртиса). Средние значения представлены в виде Ме­диана [Нижний квартиль; Верхний квартиль].

При бактериологическом исследовании мочи сте­рильные посевы отсутствовали. Во всех случаях ми­кроорганизмы, верифицированные в моче здоровых людей, регистрировали в составе аэробно-анаэроб­ных ассоциаций (от 3- до 7-компонентных). В моче об­следуемых I и II групп доминировали 3-компонентные ассоциации (40,0% и 30,0% соответственно).

В кластере ФАБ (табл. 1) в обеих группах доми­нировали коагулаза-отрицательные стафилококки (КОС) (90,0 и 80,0% соответственно). Однако, видовой спектр КОС был шире в I группе и представлен 5 вида­ми (S. epidermidis (40,0%), S. xylosus (20,0%), S. haemo- lyticus, S. saprophyticus, S warneri (по 10,0%). Во II груп­пе паттерн КОС включал 3 вида с доминированием S. haemolyticus (40,0%), реже из мочи выделяли S. epi­dermidis (30,0%) и S. saprophyticus (10,0%). Представи­тели семейства Enterobacteriaceae регистрировали в моче в 20,0% случаев в I группе и в 10,0% - во II группе. Во всех случаях из мочи выделяли банальные E. coli в незначительном количестве (табл. 1). Enterococcus spp. чаще регистрировали в моче мужчин (60,0%), их паттерн был представлен E. faecalis (30,0%), E. faecium (30,0%) и недифференцированными видами (20,0%). В моче обследуемых I группы обнаруживали только E. faecium.

При анализе таскономической структуры НАБ, вы­деленных из мочи обнаружена следующая тенденция (табл. 1): в моче здоровых женщин доминировали Lactobacillus spp. (90,0%), Peptococcus spp. (80,0%), Propionibacterium spp. (70,0%), а в моче здоровых муж­чин - Eubacterium spp. (70,0%) и Peptostreptococcus spp. (40,0%). Дрожжеподобные грибы рода Candida, выделенные из мочи женщин были представлены C. tropicalis (20,0%) и C. albicans (10,0%). Средние уровни бактериурии для большинства таксонов ФАБ и НАБ со­ставили 102 КОЕ/мл. При проведении ПЦР мочи папилломные и гер­петические вирусы регистрировали в 40,0% случаев в обеих группах (30,0% - в I группе, 10,0% - во II груп­пе). В I группе верифицированы HPV (20,0%) и HSVII (10,0%), во II группе - только HPV (10,0%). Во всех слу­чаях при обнаружении вирусов в моче их регистриро­вали в составе вирусо-бактериальных ассоциаций. У одной здоровой женщины (10,0%) в моче обнаруже­ны ассоциации HPV+HSVII.

Понимание того, как развиваются микробиота и виробиота мочи у здоровых людей под действием разнообразных факторов является важным для бу­дущих исследований. Потому, что эти исследования являются основой в интерпретации результатов бак­териологического и вирусологического исследований при различных урологических заболеваниях. Они мо­гут влиять на патогенетические механизмы, клинику, исход урологических заболеваний и открывать новые перспективы в лечении [9][10].

Ряд наших, ранее опубликованных исследований свидетельствуют о том, что в моче пациентов с ин­фекциями верхних и нижних мочевых путей чаще ре­гистрируется аэробная-анаэробная микст-инфекция [11][12][13][14][15][16]. Аналогичная картина наблюдаются в моче здоровых людей. В обследованных группах ПЦР мочи показал наличие ДНК папилломавируса и вируса про­стого герпеса 2 типа (HSVII) в 30% и 10% случаев, со­ответственно. Наличие вирусной инфекции в моче было также продемонстрировано в исследовании о роли ВПЧ как высокого, так и низкого риска в генезе хронического рецидивирующего цистита у женщин [17]. Santiago-Rodriguez TM et al. в своем исследова­нии показали, что моча, как здоровых субъектов, так и с инфекцией мочевых путей (ИМП) имеет свои виромы, а ВПЧ является частью вирома мочи у 95% ис­следуемых субъектов, как мужчин, так и женщин [3][10]. В моче человека могут присутствовать аденови­русы, полиомавирусы, которые являются патогенны­ми в основном для лиц с иммунодефицитом и пере­несших трансплантацию почек, костного мозга [8][18]. Для характеристики мочевого микробиома ряд исследователей применяли метод секвенирования гена 16S рРНК, используя образцы мочи как от здоро­вых людей, так и от пациентов с ИМП, инфекциями, передаваемыми половым путём и различными за­болеваниями верхних мочевых путей. Однако метод метагеномного секвенирования гена 16S рРНК имеет одно существенное ограничение, которое заключает­ся в невозможности дифференцировки между живы­ми и мертвыми бактериями [19][20][21]. В нашем иссле­довании при использовании расширенного набора питательных сред с учётом аэробной и анаэробной методик культивирования мы показали, что в моче здоровых женщин доминируют Lactobacillus spp. (90,0%), Peptococcus spp. (80,0%), Propionibacterium spp. (70,0%), а в моче здоровых мужчин - Eubacterium spp. (70,0%) и Peptostreptococcus spp. (40,0%). Fouts DE et al. при изучении гендерных различий микробиома в средней порции мочи, используя метод сек­венирования гена 16S рРНК пришли к выводу, что у женщин преобладают Lactobacillales spp., а у мужчин Corynebacterim spp. [22].

Данные о верификации различных таксонов ви­русов в моче здоровых людей являются основой для понимания и детализации этиологической структуры ИМП, решения вопроса о необходимости включения верификации различных таксонов вирусов при ИМП, особенно в ситуациях с относительным «бактериаль­ным благополучием» при бактериологическом иссле­довании мочи и разработке подходов к персонализи­рованной терапии.

Дальнейшие исследования должны быть направ­лены на увеличение когорты обследуемых здоровых людей для получения корректной фактограммы бак­териальных и вирусных паттернов, присутствующих в моче здоровых людей.